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總結分享一些關于多肽合成的一些問題
點擊次數：470 發布時間：2023-02-08
多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物，合成過程可以連續進行，進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽的合成，基本都是固相合成。其基本過程如下：
基于Fmoc化學合成，先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點，同其它的氨基酸已經活化的羧基作用形成肽鍵，不斷重復這一過程，即可得到多肽。根據多肽的氨基酸組成不同，多肽后處理方式不同，純化方式也有差異。
那么關于多肽合成是的一些問題，下面為大家總結了一些一起來看看吧。
1.做免疫用的多肽多長為合適?
一般約10-15個氨基酸，當然長一些免疫效果好一些，不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上，效果較好。另外，10aa以下的多肽免疫效果比較差。
2.免疫用多肽的純度需要很高嗎?
一般而言，免疫用Peptide，70-85%即可。
3.我們合成的多肽溶解性不好，多肽就有問題對嗎?
很難準確預測一個多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認為多肽合成有問題這個觀念并不正確。
4.多肽狀態是如何?如何保存儲存?
我們提供的多肽是粉末狀，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異，多肽一般長期保存需要避光保存，并應保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短時間的話是以室溫運輸。
5.如何溶解多肽
溶解多肽是非常復雜的事情，一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗，在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。 下列方法有助于您選擇合適的溶劑：
(1)判定多肽的電荷特定，設定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其它氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。
(2)如果凈電荷數>0，多肽為堿性，用水溶解：如果不溶解或溶解性不大，加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
(3)如果凈電荷數<0，多肽為酸性，用水溶解;如果不溶解或溶解性不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀釋。
(4)如果凈電荷數=0，多肽為中性，一般需要用有機溶劑如乙腈，甲醇或異丙醇，DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。
6.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質?
粗品和脫鹽級別的多肽中多肽和非多肽類雜質：如非全長多肽和多肽后處理的一些原料如DTT、TFA等。
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